فصل وتنقية وتوصيف بروتينات الصدمة الحرارية H S P70 من دم فروج اللحم المجهدة حرارياً
أطروحة مقدمة الى
الثروة الحيوانية /كلية الزراعة/ جامعة بغداد
امجد حميد سعيد الكيال
المستخلص
اجريت هذه الدراسة في جامعة بغداد – كلية الزراعة – قسم الثروة الحيوانية في حقل الدواجن وابتداءً من تشرين الاول 2002 ولغاية مايس 2004 لغرض فصل وتنقية وتوصيف بروتينات الصدمة الحرارية Heat shock proteins في دم طيور فروج اللحم المجهدة بمستويات حرارية مختلفة.
استخدم 250 فرخاً من فروج اللحم (فاوبرو) بعمر يوم واحد المرباة في ظروف تربية طبيعية من حيث درجة الحرارة والامور الاخرى ولغاية عمر 45 يوماً اذ قسمت الطيور عشوائياً على معاملات التعرض الحراري التي شملت مستويين حراريين 35 ْ و 37 ْم وللمدد 30 ، 60 و 90 دقيقة و 60 و 120 و 180 دقيقة لكل مستوى حراري.
نقي البروتين HSP70 من مصل عينات الدم المأخوذة من الطيور بعدة خطوات اشتملت على الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 55% وكروموتوغرافيا التبادل الايوني بعمود DEAE-Cellullose A50 ثم الترشيح الهلامي في Sephacryl-S200 وتم تحديد نقاوة البروتين بتقنية الترحيل الكهربائي واظهرت النتائج بعض مواصفات البروتين منها :
1- كان الوزن الجزيئي للبروتين HSP70 يساوي 70286 دالتون عند تقديره بطريقة الترشيح الهلامي بعمود Sephacryl-S200 .
2- ان البروتين المنقى HSP70 هو عبارة عن بروتين كربوهيدراتي glycoprotein وتمثل الكربوهيدرات نسبة 22.482% من البروتين.
3- درجة الحرارة المثلى لعمل بروتين HSP70 مختبرياً 50 ْم.
4- لبروتين HSP70 القدرة على حماية انزيم الانفرتيز تحت درجات حرارة عالية 50 ْ و 60 و 70 ْم مختبرياً ، بعد حضن الانزيم مع البروتين وقد احتفظ الانزيم بفعالية متبقية حوالي 70 ، 68 و 60% على التوالي بالمقارنة مع فعالية متبقية 36 ، 26 و صفر% لنفس درجات الحرارة من دون حماية HSP70 على التوالي.
5- تأثر بروتين HSP70 بالهضم بالبروتييزات بوساطة انزيم الببسين وعليه لا ينصح باعطاءه عن طريق الجهاز الهضمي.
6- وفر مقاومة حرارية مكتسبة مصطنعة بتجربة التحدي من خلال الانخفاض المعنوي لمستوى الهلاك قياساً مع طيور السيطرة من خلال حقنه بالوريد بمقدار 250 مايكروغرام.
7- وجد ان شدة وطول مدة درجة الحرارة تؤثر بشكل بالغ وبصورة معنوية في :
أ- معدل تركيز بروتين مصل الدم اذ ارتفعت بصورة معنوية مع مستوى درجة الحرارة وطول مدة التعرض بسبب الاستجابة للعامل المجهد وابداء المقاومة له.
ب- ارتفاع معدلات سكر مصل الدم مع شدة وطول العامل المجهد الحراري للحاجة للطاقة لغرض المقاومة.
جـ- انخفاض معدلات الاوزان بعد اسبوع من التعرض للاجهاد الحراري للطيور المعرضة وبصورة معنوية قياساً مع معاملة السيطرة باستثناء مدة التعرض لمدة 30 دقيقة وعلى المستويين الحراريين 35 و 37 ْم.
